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InertSustainSwift C18色譜柱操作說明

更新時間:2024-11-22      點擊次數(shù):35

1.色譜柱信息

  InertSustainSwift C18液相色譜柱是在新型高純度球狀硅膠基質(zhì)上鍵合十八烷基的反相分離模式色譜柱,適合用于弱極性至中等極性例如合成藥物、中藥、多肽、有機酸等的分離。InertSustainSwift C18液相色譜柱從硅膠基質(zhì)的合成,到化學(xué)處理和裝填后的性能檢測,都是在本公司嚴格的產(chǎn)品控制下進行,因此不同批次的柱與柱之間具有優(yōu)異的重現(xiàn)性;通過獨有的裝填技術(shù)填裝的色譜柱柱床密度均一穩(wěn)定,從而確保色具有高柱效,硅膠粒徑分布均勻,確保柱壓極低。InertSustainSwift C18液相色譜柱采用改性硅膠基體,惰性化程度很高,端基封尾徹底,即使是酸性和堿性或者金屬配位性化合物化合物分析,也能保持良好的峰型,可以用于方法開發(fā)中反相ODS柱的首選色譜柱。

為了能長期保持InertSustainSwift C18液相色譜柱的優(yōu)越性能和正確的使用色譜柱,在使用色譜柱之前請仔細閱讀本說明書。

 

2.使用前的檢查與須知事項

檢查包裝箱的外觀有無異常。

●打開包裝,檢查色譜柱的填料名稱、尺寸規(guī)格、連接型式是否相符。

●色譜柱中封存流動相為乙腈/水或者甲醇/水的混合物,具體比例請參考柱效報告。

 

3.色譜柱填料規(guī)格

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4.色譜柱安裝與操作

  色譜柱在運輸過程中,兩端用堵頭密封。當(dāng)將色譜柱接入色譜儀器系統(tǒng)時,首先請確保系統(tǒng)中的溶劑和液相柱中封存溶劑是互溶的。如果不能互溶,請采用一種能夠與系統(tǒng)及色譜柱都能互溶的溶劑對系統(tǒng)進行充分過渡之后再將色譜柱連接到系統(tǒng)中,并注意流動相的方向要與柱上標記的方向保持一致。我公司提供的常規(guī)液相色譜柱標準接頭型式為1/16英寸Waters接頭螺絲型(如下左圖),同時還有耐高壓液相系統(tǒng)的UP(如下右圖),如果需要其他接頭型式請另行咨詢。

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  色譜柱連接好之后,請確認無漏液現(xiàn)象之后再進行后續(xù)操作。

  新的InertSustain C18柱是保存在乙腈/水或者甲醇/水的混合溶液中,在儲存和運輸過程中,硅膠填料可能會干涸,推薦用純的甲醇或乙腈沖洗10~20倍柱體積對色譜柱進行活化,流速從0.1mL/min緩慢上升到最佳流速。(如果在活化過程中即發(fā)現(xiàn)壓力和基線不正常時,請及時聯(lián)系我公司工程師及時處理。)然后再用不含緩沖鹽的流動相進行平衡20倍柱體積,

再用流動相平衡,待壓力和基線穩(wěn)定之后,再進樣分析。

 

5.樣品與流動相

  為避免色譜柱堵塞,所有樣品及溶劑,包括緩沖溶液在內(nèi),在使用前必須用0.45μm或者0.22μm的濾膜過濾。InertSustainSwift C18色譜柱耐純水能力強,可以使用純水或者純的緩沖鹽水溶液作為流動相。

 

6.色譜柱的保養(yǎng)

pH InertSustainSwift C18色譜柱可在pH1~10范圍內(nèi)使用,為保持色譜柱良好的壽命,請避免較強的酸或堿性樣品或者流動相進入色譜柱。

耐壓 常規(guī)色譜柱耐受壓力為20MPa,HP系列耐壓為50MPaUHPLC系列耐受80MPa,但是正常的壓力建議控制在耐受壓力的2/3以下。長時間在高壓下運行會對色譜柱造成難以修復(fù)的損害,因此系統(tǒng)壓力升高之后,建議盡快排查系統(tǒng),如果是色譜柱壓力升高,請及時采用適當(dāng)溶劑沖洗色譜柱。

溫度 最高操作溫度為60℃,長時間在高溫下操作會顯著降低色譜柱壽命。

沖洗 新柱是保存在高比例的有機溶劑中,如果是采用緩沖鹽流動相的情況下,做樣之前請務(wù)必用比緩沖鹽稍高比例的水充分過渡,然后再用流動相平衡。每天做樣完畢之后,應(yīng)充分沖洗色譜柱,首先用稍高比例的水相沖洗,例如乙腈/=1090(v/v)沖洗20倍柱體積,然后用乙腈或者高比例的乙腈/水混合溶液沖洗20倍柱體積,最后保存在此流動相下,其中沖洗用的水相也可以添加一定比例的酸,例如0.1%的甲酸、乙酸或者磷酸等等,可能會有更好的清洗效果。如果是做蛋白質(zhì)、多肽類易吸附的樣品,為了不讓細孔內(nèi)部變性,建議采取含三氟乙酸的流動相梯度沖洗,反復(fù)沖洗三次以上。

反沖 如果色譜柱用久了之后,有明顯的雜質(zhì)吸附或者柱壓明顯升高,建議可以采取反沖方法沖洗色譜柱。具體方法如下:柱子反接,不接檢測器,乙腈/=1090(v/v),沖洗50倍柱體積,之后100%乙腈沖洗50倍柱體積。流速采用平時分析流速的1/3,然后正接,乙腈/=1090(v/v),沖洗10倍柱體積,然后用流動相平衡做樣。

儲存 色譜柱長期不用,建議日常沖洗方法完成之后,再用純乙腈或者甲醇沖洗20倍柱體積,然后保存在該流動相條件下,之后卸掉色譜柱,兩端用堵頭密封,并放在溫度變化小的場所。


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